항염(抗炎)시험이란, mouse 유래 대식세포(RAW 264.7)에 인위적으로 염증반응을 유도한 후, 시료를 처리하여 염증과 관련된 여러가지 물질들의 발현량을 측정 비교하여 시료가 염증 억제에 효과가 있는지 확인하는 시험법이다.
염증(炎症)을 가라앉히고 저항하는 효능을 항염(抗炎,anti-inflammation)이라고 한다. 염증(炎症) 또는 염(炎)은 생체 조직의 유해한 자극원 예를 들어, 병원균, 손상된 세포, 자극원에 대한 생체반응 중 하나로 면역세포, 혈관, 분자생물학적인 중간체들이 관여되어 있는 보호반응이다. 염증(炎症)은 미생물에 의한 감염 또는 상처, 수술, 화상, 동상, 전기자극, 화학물질 등 다양한 원인에 의하여 발생한다.
한국분석시험연구원의 항염시험은 ‘산화적손상시험: NO assay, SOD-like activity와 염증성 단백질 분석시험: Real-time RT-qPCR, Western blot’이 있다.
## 항염시험은 세포독성 시험이 선행 된 후 진행되어야 결과를 안정적으로 확인할 수 있습니다. – 세포독성시험에 사용되는 세포주는 RAW264.7 입니다.##
Test method - 산화적 손상 시험
산화적 손상 시험이란,
NO assay(NO production quantitative analysis) : in vitro상에서 cell supernatant에 녹아있는 NO의 양을 정량 포유류는 염증성 자극을 받으면 대식세포에 의해 NO(nitric oxide)를 합성함.
이는 혈관을 확장 시키며 염증을 억제하는 신경전달물질로 RAW 264.7 세포주에 염증유발 물질(LPS)과 시료를 함께 처리함.
일정 시간 이후 생성된 NO의 양을 측정하여 항염증 효과의 정도를 파악함. – 결과(단위) : NO 농도 (μM)
SOD-like activity(superroxide dismutase) : 생체 내 항산화 효소 중의 하나인 SOD 유사활성 정도를 측정하는 시험법
연속희석(serial dilution)한 시료와 염증 유도 물질(LPS)을 처리한 세포를 일정 시간 배양한 뒤 세포를용해 시켜
세포용해물(lysate)과 시약의 반응을 통해 생체 내 항산화 효소 중 하나인 SOD 유사활성 정도를 측정하는 시험법.
– 결과(단위) : SOD 유사활성능 (%)
시료타입: 액상 및 파우더
소요기간: 4/6주
Test method - 염증성 단백질 분석시험
염증성 단백질 분석시험이란,
면역세포는 cytokine이라는 단백질 면역조절제를 분비함.
이에 염증유발물질(LPS)에 의해 자극받은 RAW 264.7 세포주에 시료를 처리하여 분비된 cytokine의 양을 비교 분석함.
이는 시료 처리 기간 및 농도 그리고 종류에 따른 비교가 가능함.
Real-time RT-qPCR : 염증성 cytokine의 양을 측정하여 항염효과 측정
– 대조군와 시료처리군 세포의 total RNA를 추출해 Oligo dT로 cDNA를 합성하여, target gene을 정량하는 시험법.
– 결과(단위) : mRNA expression rate
Western blot : 염증성 cytokine인 IL-1b의 단백질 발현양 측정하여 항염효과 측정
– 대조군와 시료처리군 세포의 단백질을 추출해 target gene의 발현양을 정량하는 시험법.
– 결과(단위) : Relative protein level, Image
## 그 외 유전자 발현량 측정 요구 시 상담 후 결정(시험 설계 필요)
시료타입: 액상 및 파우더
소요기간: Real-time RT- qPCR 8/12주, Western blot 10/14주
