항암[抗癌, Anticarcinogenic)이란 암세포(癌細胞)의 증식(增殖)을 억제하거나 암세포(癌細胞)를 죽이는 것을 뜻한다.
항암의 효과치를 cell viability(%), mRNA expression rate, Relative protein level 결과 값으로 확인하는 시험으로 암의 발증(전이를 포함)을 억제하는 작용을 말한다.
암의 발증 원인은 약 10%가 바이러스[virus]나 방사선[放射線], 자외선에 의한 것이고 나머지 대부분은 식품, 담배, 대기오염 물질 등에서 유래하는 화학물질에 의하는 것으로 추정한다.
화학물질에 의한 발암은 initiation(개시기)과 promotion(촉진기), progression(증식기)의 세가지 단계로 나뉜다.
전자의 과정에서는 세포의 유전자 DNA에 불가역적인 손상, 변화가 일어나서 변이세포로 되고 후자의 과정에서는 그것이 고정되어 암세포[癌細胞]로 되어 증식을 반복한다.
Initiation(개시기)을 유도하는 화학물질에는 N-nitrosamine(제이급아민과 아질산과 반응을 생성)나 benzo(a)pyrene등 다환방향족 탄화수소가 알려져 있고
한편 promotion(촉진기), progression(증식기)을 유도하는 화학물질로서는 croton 기름 중에 함유된 TPA(phorbol ester)나 식염, 담즙산[膽汁酸] 등이 알려져 있다.
차 잎 추출물 혹은 카테킨류[catechins]가 미생물이나 동물 배양세포를 사용한 실험에서 항 돌연변이[突然變異] 작용, 항promotion(촉진기) 작용을 나타낸다는 것이 발단이 되어
쥐를 사용한 시험계에서 여러가지 암(위, 소장, 십이지장, 대장, 췌장, 간장, 유선, 폐, 피부 등)에 유효하다는 것이 실증되었다.
또 다른 장기 전이의 억제작용이나 apoptosis(세포사) 유도효과도 있다고 한다.
카테킨류만 아니고 분자 내에 카텐 구조를 가지는 다당류[多糖類](복합타닌)에도 항암작용, 전이 억제작용이 발견된다.
한국분석시험연구원은 시간대 별 암세포 증식억제 확인 시험, Real-time RT-qPCR을 이용하여 유전자 발현량[mRNA expression] 측정 시험과 Western blot을 이용하여 단백질 발현량[protein expression] 측정 시험으로 항암효과를 cell viability(%), mRNA expression rate, Relative protein level 로 검사할 수 있는 시험이 있다.
## 항암시험은 세포독성 시험이 선행 된 후 진행되어야 결과를 안정적으로 확인할 수 있습니다. – 세포독성에 사용되는 세포주는 인체유래정상폐세포주인 MRC-5 또는 WI-38 입니다. ##
Test method - 암세포 증식억제 확인시험
시간당 암세포 수 측정 : 시료 처리 후 시간대 별로 암세포 증식억제정도 확인
– (전배양) 세포 배양액을 96 well plate에 well당 100 μL씩 분주한 뒤 CO2 incubator에서 37℃, 5% CO2, 24시간 배양.
– (시료 처리) 전배양 세포액에 시료 10 μL 처리하고, 동일한 배양조건에서 24, 48, 72시간 동안 반응시킨다.
– (세포 생존율 확인) 반응 후 Kit 10 μL 처리, cell-type, concentration custom / minimum 30 min, maximum 4 hours. 반응이 끝난 후 1분동안 soft-shaking, plate reader 450 nm 흡광도 측정.
– (결과 확인) control, 시료 처리군.
시료 타입: 액상 및 파우더
시험 가능 암세포 TYPE: 위암세포주(SNU-5), 간암세포주(HepG2), 폐암세포주(A549), 자궁경부암세포주(Hela), 유방암(MCF-7), 피부암(흑색종)(SK MEL-1), 그 외 암세포주 시험 희망 시 상담 후 결정
소요기간: 3/5주
결과 (단위): cell viability (%)
성적서 제공
Test method - 암세포 단백질 발현 확인시험
암세포 유전자 발현 확인 시험
– 암세포주에 시료를 처리한 뒤 세포 RNA를 추출, real-time RT-qPCR 시험 방법을 통해 암세포 사멸에 관련된 유전자의 발현 정도 측정 시험.
- Real-time RT-qPCR : 암세포 사멸에 관련된 유전자의 양을 측정하여 항암효과 측정
– 대조군와 시료처리군 세포의 total RNA를 추출해 Oligo dT로 cDNA를 합성하여, target gene의 발현양을 정량하는 시험법.
– 특정 유전자로 p53(세포 사멸을 유도), Bcl-2(세포 사멸 억제 기능 무력화), Caspase3(세포 사멸을 유도)하여 총 3가지 시험 가능.
– 결과(단위) : mRNA expression rate
- Western blot : 세포 사멸을 유도하는 p53의 단백질 양을 측정하여 항암효과 측정
– 대조군와 시료처리군 세포의 단백질을 추출하여 p53의 발현양을 정량하는 시험법.
– 결과(단위) : Relative protein level, Image
그 외 유전자 발현량 측정 요구 시 상담 후 결정(시험 설계 필요)
시료 타입: 액상 및 파우더
시험 가능 암세포 TYPE: 위암세포주(SNU-5), 간암세포주(HepG2), 폐암세포주(A549), 자궁경부암세포주(Hela), 유방암(MCF-7), 피부암(흑색종)(SK MEL-1), 그 외 암세포주 시험 희망 시 상담 후 결정
소요기간: Real-time RT- qPCR 8/12주, Western blot 10/14주
결과 (단위): mRNA expression rate
성적서 제공
